利用酵母双杂交技术筛选与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白

作者：金春梅; 周博宇; 姚远; 吴保义; 李红旺; 王楠; 于龙政^*

来源：甘肃农业大学学报, 2023, 58(03): 1-6.

DOI：10.13432/j.cnki.jgsau.2023.03.001

• 犬新孢子虫
• NcSRS2
• 酵母双杂交
• 筛选

【目的】筛选与鉴定与新孢子虫NcSRS2蛋白相互作用的Vero细胞蛋白。【方法】从Nc1株犬新孢子虫速殖子中提取DNA作为模板，PCR扩增NcSRS2基因，克隆于pGBKT7表达载体，构建诱饵载体pGBKT7-NcSRS2，转化入Y2H酵母感受态细胞，进行自激活活性验证和细胞毒性检测。利用酵母双杂交技术，以转化诱饵载体pGBKT7-NcSRS2的Y2H酵母菌株与Vero细胞cDNA文库进行酵母双杂交，筛选与NcSRS2蛋白相互作用的宿主蛋白，对阳性克隆进行测序，并用BLAST分析，筛选出与NcSRS2存在相互作用的Vero细胞蛋白质。【结果】诱饵载体pGBKT7-NcSRS2无自激活活性和细胞毒性，可用于文库筛选。运用酵母双杂交系统，筛选出2个与NcSRS2相互作用的Vero细胞成分，分别是NADH dehydrogenase subunit 1和STMN2。【结论】本研究首次运用酵母双杂交技术筛选出与新孢子虫NcSRS2相互作用的Vero细胞蛋白质，为进一步研究犬新孢子虫NcSRS2参与黏附及入侵宿主细胞的机制奠定基础。

• 单位
  吉林省畜牧兽医科学研究院; 延边大学