异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的表达

作者：方芳; 李炯; 文艳君; 田聆; 魏于全

来源：四川大学学报（医学版）, 2005, 36(2): 153-156.

DOI：10.3969/j.issn.1672-173X.2005.02.001

• 表皮生长因子受体
• 胞外段
• 毕赤巴斯德
• 分泌表达

目的实现异种同源表皮生长因子受体EGFR胞外段在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达.方法将鼠和人的EGFR胞外段目的基因(mer,her)与分泌型毕赤酵母表达载体pPICZaA重组,构建了相应的重组表达质粒pPICZaA-mer和pPICZaA-her,用Sac I将重组质粒线性化后,电穿孔转化酵母菌株GS115,利用Zeocin筛选阳性克隆,挑出阳性克隆用甲醇小规模诱导表达后,进行SDS-PAGE分析及Western-blot检测,筛选高表达量的克隆作大规模诱导表达.结果获得了鼠和人的EGFR胞外段目的蛋白在毕赤巴斯德酵母中的分泌性表达,SDS-PAGE分析及Western-blot检测得到预期条带,相对分子质量约为95×103.免疫印迹分析表明,表达蛋白具有良好的抗原性和特异性.结论pPICZaA-mer和pPICZaA-her重组质粒在甲醇营养型酵母中可经甲醇诱导表达鼠和人的EGFR胞外段目的蛋白.

• 单位
  四川大学华西医院