人线粒体肌酸激酶广泛型亚型的原核表达、抗体制备及其临床应用意义

作者：张建; 王爱华; 顾鹏飞; 于嘉屏

来源：第二军医大学学报, 2004, (12): 1320-1324.

DOI：10.16781/j.0258-879x.2004.12.014

• 线粒体肌酸激酶
• 基因表达
• 胃肠肿瘤 ubiquitous mitochondrial creatine kinase
• gene expression gastrointestinal neoplasms

目的:在大肠杆菌中克隆表达人线粒体肌酸激酶广泛型亚(uMtCK)的蛋白,免疫家兔制备抗uMtCK的多克隆抗体,检测胃肠肿瘤组织中uMtCK的表达。方法:采用RT-PCR从培养的肿瘤细胞(HeLa细胞)中成功扩增出1062bp的uMtCK基因片段,构建重组质粒pQE30-uMtCK,转化大肠杆菌表达酶融合蛋白,对表达产物进行SDS-PAGE、Western印迹鉴定及酶活性测定。纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备了抗uMtCK多抗。免疫组化法检测59例胃及直肠肿瘤组织切片中uMtCK的表达。结果:RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠杆菌M15中实现了高效、可溶性的融...

• 单位
  中国人民解放军第二军医大学; 长征医院实验诊断科