纤维微菌β-1,3-葡聚糖酶的克隆表达及对灵芝细胞壁的水解作用

作者：杨梦莲; 单逸蓝; 沈微^*; 朱新文; 杨海泉; 陈献忠; 陈磊; 夏媛媛

来源：食品与发酵工业, 2023, 49(01): 10-18.

DOI：10.13995/j.cnki.11-1802/ts.031522

• 纤维微菌
• β-1,3-葡聚糖酶
• 分泌表达
• 灵芝
• 细胞破碎

该文旨在研究一种酶解灵芝(Ganoderma lucidum)菌丝体从而提高其胞内蛋白提取效率的方法。通过PCR方法扩增获得纤维微菌(Cellulosimicrobium sp.)CICIM6906的β-1,3-葡聚糖酶编码基因，该基因命名为bgl6906并与表达载体连接，构建重组质粒pET28a-bgl6906,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),获得重组大肠杆菌BL21(DE3)/pET28a-bgl6906。重组菌在TB培养基中进行诱导表达，表达产物在自身信号肽引导下大部分分泌到细胞外。以茯苓多糖为底物时，重组酶BGL6906纯酶比酶活力为567.8 U/mg,最适pH为5.5,最适温度为50℃。重组菌在15 L发酵罐中发酵72 h胞外酶活力达到67 U/mL。重组酶BGL6906与果胶酶交替水解灵芝菌丝体培养物，可以有效水解细胞壁，获得部分原生质体。进一步辅助短时超声波破碎可以大幅度提高灵芝胞内产物的释放。

• 单位
  工业生物技术教育部重点实验室; 生物工程学院; 江南大学