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摘要
乳白石蒜(Lycoris albiflora)新品种’梦幻少女’的渐变花色为石蒜属(Lycoris)特殊花色，二氢黄酮醇4-还原酶基因(dihydroflavonol 4-reductase, DFR)是乳白石蒜花瓣花色变化的关键酶基因。为进一步研究该基因的功能和作用，本研究利用RT-PCR和染色体步移技术(Genome walking)分别从乳白石蒜花瓣中克隆到LaDFR1基因及启动子序列，对LaDFR1基因进行生物信息学和表达模式分析，并进一步在烟草(Nicotiana tabacum)中过表达LaDFR1，研究其功能。结果表明，LaDFR1 cDNA序列OFR长1 161 bp，编码386个氨基酸。LaDFR1蛋白保守结构域具有NADPH和底物结合位点，属NADB-Rossmann超基因家族。序列比对和系统发育分析显示，乳白石蒜与百子莲(Agapanthus praecox)的DFR氨基酸序列一致性达到80.43%，聚为一个分支。qPCR检测发现，LaDFR1基因在乳白石蒜3个不同开花时期均有表达，开花第1天表达量最低，随着开花时间的延长，表达量逐渐上升；LaDFR1主要在花瓣中表达，其次是花丝，在花葶中表达最低。获得一条长1 570 bp的LaDFR1基因启动子序列，含有多个光照、脱落酸诱导、MYB和NAC结合顺式作用元件，构建LaDFR1pro:PBI121整合载体瞬时转化烟草叶片，光照条件下较黑暗处理诱导的GUS活性更高，说明LaDFR1启动子具有光诱导活性。综上，本研究成功获得LaDFR1基因及其启动子序列，LaDFR1可能参与乳白石蒜花瓣花青素苷的合成和积累，这一研究结果可为进一步研究乳白石蒜花色变化的调控及用基因工程进行花色改良提供靶基因。
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