仅具有CDR3的单域抗体NBL42作为纳米抗体亲和力转移的移植框架研究

作者：刘娅菲; 冯亚宁; 张鑫; 谢媛; 李江伟^*

来源：国际生物医学工程杂志, 2022, 45(03).

• CDR3移植
• 亲和力转移
• 纳米抗体
• 抗原结合
• 通用框架

目的评价前期获得的1株仅具有互补决定区3(CDR3)的单域抗体(sdAbs)NBL42作为纳米抗体亲和力移植通用框架的潜力。方法采用亲和力转移的方法将分别结合蒜氨酸酶、程序性死亡受体-1(PD-1)、溶菌酶和CD47的4种抗体VHH-A4、VHH-H5、cAb-Lys3和B6H12的CDR3序列移植到NBL42对应的CDR3区。DNA合成获得4种仅具有CDR3的重组sdAbs, 镍柱纯化并获得目的蛋白, 间接ELISA法检测4种重组纳米抗体与抗原的结合及其热稳定性。用Swiss Model三维建模分析移植前后sdAbs的空间结构。结果纯化后的4种重组蛋白在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)中呈现单一条带, 相对分子质量与预期相符。移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5CDR3获得了与蒜氨酸酶和PD-1的特异结合能力, 但结合活性降低了约50%, 并转变为可溶性表达形式。移植后的重组sdAbs NBL42-L3CDR3和NBL42-B6H12CDR3完全丧失了对原抗原溶菌酶和CD47的结合能力。在热稳定性分析中, 移植后的重组sdAbs NBL42-A4CDR3和NBL42-H5/CDR3保留了约50%的剩余结合活性。根据C88Y突变实验和Swiss Model三维建模分析, 提示NBL42-FR3中88位半胱氨酸对于亲和力转移可能具有重要作用。结论 NBL42具有作为CDR3移植和亲和力转移框架的潜力。

• 单位
  新疆医科大学附属肿瘤医院