M2型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏HL-1细胞KCa3.1的作用及可能机制

作者：陈慧宇; 刘弟世闻; 姚亚君; 付韫韬; 何山青; 赵庆彦^*

来源：中国心脏起搏与心电生理杂志, 2023, 37(03): 224-231.

DOI：10.13333/j.cnki.cjcpe.2023.03.007

• 心血管病学
• M2型巨噬细胞外泌体
• KCa3.1
• 电重构
• 心房颤动

目的 探究M2型巨噬细胞来源的外泌体对快速起搏小鼠心房肌细胞(HL-1)KCa3.1的作用及可能机制。方法 提取C57/6J小鼠骨髓巨噬细胞并分为未分化组(未加干预的骨髓巨噬细胞)和分化组(骨髓巨噬细胞经白细胞介素-4干预24 h分化为M2型巨噬细胞)。分别收集分化组和未分化组细胞培养液上清，采用超速离心法得到外泌体。实时荧光聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测miR-146a-5p在分化组和未分化组外泌体中的表达情况。将HL-1细胞分为8组，分别为对照组(HL-1细胞未施加任何干预)、起搏组(HL-1细胞快速起搏)、共培养组(HL-1细胞快速起搏的同时与M2型巨噬细胞来源的外泌体共培养)、模拟物组(HL-1细胞快速起搏同时转染miR-146a-5p模拟物)、模拟物对照组(HL-1细胞快速起搏同时转染模拟物对照)、抑制物组(HL-1细胞快速起搏同时转染miR-146a-5p抑制物)、抑制剂物对照组(HL-1细胞快速起搏同时转染抑制剂物对照)、PDTC组[HL-1细胞起搏同时给予核因子-κBp65(NF-κB p65)特异性阻断剂PDTC]。采用qRT-PCR检测各组中miR-146a-5p相对表达量。免疫荧光检测共培养组中HL-1细胞对外泌体的摄取情况。蛋白质免疫印迹检测上述各组KCa3.1和磷酸化核因子-κBp65(p-NF-κBp65)的表达情况。全细胞膜片钳记录各组KCa3.1的电流密度。结果 与未分化组比较，分化组外泌体miR-146a-5p表达量更高(P<0.01)。与对照组比较，起搏组KCa3.1和p-NF-κBp65蛋白相对表达水平和KCa3.1的电流密度明显升高(P<0.001)。与起搏组比较，共培养组和PDTC组KCa3.1和p-NF-κBp65的蛋白相对表达水平和KCa3.1的电流密度明显降低(P均<0.05)。与模拟物对照组比较，模拟物组KCa3.1和p-NF-κBp65的蛋白相对表达水平和KCa3.1的电流密度明显下调(P均<0.05)。与抑制物对照组比较，抑制物组明显提高了KCa3.1和p-NF-κBp65蛋白相对表达水平和KCa3.1的电流密度(P均<0.01)。结论 M2型巨噬细胞外泌体及其所携带的miR-146a-5p可能通过调控NF-κB信号通路进一步作用于快速起搏HL-1细胞中的KCa3.1。

• 单位
  武汉大学; 武汉大学人民医院