链霉菌769胆固醇氧化酶基因克隆、表达及生物学活性分析

作者：佟雨航; 谭笑; 杜茜; 张正坤; 徐文静; 路杨; 李启云

来源：中国生物防治学报, 2015, 31(06): 889-896.

DOI：10.16409/j.cnki.2095-039x.2015.06.011

• 胆固醇氧化酶
• 克隆
• 表达
• 活性分析

胆固醇氧化酶(cholesterol oxidase,EC 1.1.3.6)是胆固醇降解代谢过程中的关键酶,在食品开发、医疗保健、临床检测、生物农药等方面具有广泛的应用价值。通过PCR方法从链霉菌Streptomyces ahygroscopicus 769的基因组中扩增得到769Ch OA基因(Gen Bank accession No.KF290994)。该基因全长为1578 bp,编码一个由525 aa组成的蛋白质,蛋白理论分子量为57 k Da,等电点为6.29。769Ch OA与来源于S.natalensis的胆固醇氧化酶基因的同源性为91%。构建了硫氧还蛋白-769Ch OA融合的表达载体p ET32a::769Ch OA,以Escherichia coli Origami B(DE3)为表达宿主,获得了能可溶性表达的胆固醇氧化酶重组菌。经Ni亲和层析纯化得到的酶蛋白比活力为5.90 U/mg。酶学性质分析表明,该酶对胆固醇的催化活性最高,对测定的7种胆固醇类似物也都具有一定的催化能力。酶的最适温度和p H范围为2040℃和p H 6.08.5,其活性均高于80%,且在30℃和p H 7.0时表现出最大的活性,酶活分别达到6.83和6.44 U/mg。酶在低于40℃和弱碱性条件下具有很好的稳定性。该酶对鳞翅目害虫亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis(Guenée)和水稻二化螟Chilo suppressalis(Walker)幼虫具有很强的杀虫活性,半致死浓度分别为27.4和17.1μg/m L。

• 单位
  吉林农业大学; 吉林省农业科学院植物保护研究所; 农业部