NPM1 A型突变体对TGF-β1诱导K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响

作者：吴正财; 王成艳; 吴香新; 许昌声; 林敏辉

来源：中华转移性肿瘤杂志, 2019, 2(01): 15-20.

• NPM1
• K562细胞
• TGF-β1
• P-AKT
• 细胞活力

目的观察核仁磷酸蛋白1(nucleophosmin 1, NPM1)A型突变体过表达对TGF-β1诱导的K562细胞活力及AKT磷酸化水平的影响。方法将携带NPM1 A型突变体的腺病毒荧光载体(Ad5-NPM1)感染髓系白血病K562细胞, 建立过表达NPM1蛋白的K562细胞株。利用Western blot法及ELISA法分别检测细胞NPM1蛋白表达及上清液蛋白含量;利用Western blot法检测TGF-β1处理对K562细胞AKT、P-AKT蛋白表达的影响。MTT法检测细胞活力;Western blot法测定细胞内NPM1、AKT、P-AKT蛋白水平。结果重组腺病毒载体Ad5-NPM1感染K562细胞荧光强度随感染复数(multiplicity of infection, MOI, 30～200)增加而增强, 转染第3天即观察到细胞内绿色荧光信号。K562细胞NPM1蛋白表达水平呈Ad5-NPM1感染复数(30～200)依赖性增加(r=0.85), 与空载组(Ad5-vector-100)相比, Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组的NPM1蛋白表达水平均显著增高(P<0.01)。ELISA结果也显示K562细胞上清液NPM1蛋白水平呈Ad5-NPM1感染复数(30～200)依赖性增加(r=0.92), 与空载组(Ad5-vector-100)相比, Ad5-NPM1-30、Ad5-NPM1-100组K562细胞上清液NPM1蛋白含量均显著增高(P<0.01)。TGF-β1(10 ng/ml)能够时间依赖性诱导K562细胞AKT蛋白磷酸化, 但对总AKT水平没有明显影响。单TGF-β1处理组与TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-Vector-100组细胞内P-AKT水平的差异无统计学显著性(P>0.05), 而TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-NPM1-100组K562细胞P-AKT水平显著高于单TGF-β1处理组(P<0.05), 各组总AKT水平未见明显差别(P>0.05)。与空白对照(CT)组相比, TGF-β1(10 ng/ml)处理可促进K562细胞的活力;但TGF-β1(10 ng/ml)+Ad5-NPM1-100组细胞的活力水平明显高于单TGF-β1处理组(P<0.01)。结论 NPM1能促进TGF-β1诱导的K562细胞的活力。NPM1促进TGF-β1诱导的K562细胞的生长可能与AKT磷酸化有关。

• 单位
  福建医科大学附属协和医院; 福建省高血压研究所; 福建医科大学; 福建医科大学附属第一医院