自建微阵列化学发光免疫分析法定量检测心肌肌钙蛋白I自身抗体及其初步临床应用

作者：何成山; 姚晓阳; 蒋秀娣; 陆志成^*

来源：检验医学, 2021, 36(03): 318-324.

• 心肌肌钙蛋白I
• 自身抗体
• 微阵列蛋白芯片
• 化学发光免疫分析法
• 急性冠状动脉综合征

目的基于微阵列蛋白质芯片技术建立定量检测心肌肌钙蛋白I自身抗体(cTnIAAb)的微阵列化学发光免疫分析法,并评价该方法的检测性能。方法以心肌肌钙蛋白I(cTnI)-C融合蛋白为检测抗原,对抗原点样浓度、封闭液、封闭时间和二抗进行筛选,以检测结果信噪比最大为标准优化条件。以100名健康体检者(正常对照组)cTnIAAb检测灰度值的第95百分位数为临界值,建立cTnIAAb检测的标准曲线,并评价微阵列化学发光免疫分析法的检测性能(稳定性、精密度、最低检测限、线性范围等)。采用微阵列化学发光免疫分析法检测500例血清cTnI>0.1 ng/mL的急性冠状动脉综合征(ACS)患者(ACS组)的血清cTnIAAb,采用免疫印迹法验证其特异性。结果最优实验条件:抗原点样浓度为50μg/mL,封闭液为2%人乳,最佳封闭时间为12 h,二抗为辣根过氧化物酶(HRP)-羊抗人IgG抗体。微阵列化学发光免疫分析法检测高、低值cTnIAAb的精密度良好,变异系数(CV)均<15%;空白限(Lo B)、检测限(LoD)分别为0.12、0.23 AU/mL;线性范围为0.23～815.00 AU/mL。免疫印迹法结果显示,cTnIAAb阳性样本和阳性对照在相对分子质量40 000～55 000处均出现特异性条带。ACS组血清cTnIAAb阳性率为8.4%(42/500),明显高于正常对照组[2%(2/100)](χ2=5.023,P<0.05);但血清cTnIAAb浓度2个组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析结果显示,ACS组cTnIAAb与cTnI无相关性(r2=0.1,P>0.05)。结论自建的定量检测cTnIAAb的微阵列化学发光免疫分析法具有良好的检测性能,可为cTnIAAb的临床应用提供较好的方法学基础。

• 单位
  上海中医药大学