多能干细胞关键因子Oct4 RNA结合蛋白的分离与鉴定

作者：马姬; 郭传亮; 范书玥; 薛燕^*; 曾凡一^*

来源：上海交通大学学报 (医学版), 2019, 39(01): 4-10.

• Oct4
• RNA结合蛋白
• 胚胎干细胞
• RNA免疫沉淀

目的·分离多能干细胞关键因子Oct4的RNA结合蛋白。方法·培养小鼠胚胎干细胞(R1),从中提取细胞总RNA,反转录为cDNA,PCR扩增Oct4并转录为m RNA。采用链霉素亲和层析和质谱技术筛选候选RNA结合蛋白,采用RNA免疫沉淀技术鉴定候选RNA结合蛋白。结果·经高效液相色谱-质谱法鉴定和筛选出121个能与Oct4 3’非翻译区(untranslated region,UTR)和Oct45’UTR相结合的RNA结合蛋白,肽段图谱匹配数≥2的有11个。并对其中的7个候选RNA结合蛋白进行了进一步验证,结果显示Oct4可与DSP、SOD1、LMNA、NPM1、PSIP1、NCL和HDGF蛋白发生相互作用,其中HDGF与Oct4结合能力最强。结论·Oct4RNA结合蛋白的鉴定将为Oct4的调控机制提供一定理论依据,为后续其功能研究提供基础。

• 单位
  基础医学院; 上海交通大学