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摘要
目的研究微小RNA-21(miR-21)在宫颈癌(CC)中的表达,探讨其下调对CC细胞增殖的作用及可能机制。方法选取2016年01月至2018年06月进入内蒙古自治区人民医院救治的56例CC患者和健康志愿者67例,收集56例CC患者外周血、癌组织与癌旁组织,67例健康志愿者外周血,计算CC患者的肿瘤尺寸,采用实时定量PCR检测CC患者和健康志愿者外周血中HPV16、HPV18、miR-21含量,CC组织及癌旁组织中miR-21含量;采用Pearson相关性分析miR-21与HPV16、HPV18相关性;qRT-PCR检测宫颈正常上皮细胞H8,CC细胞系C4-I、C4-II、Hela、SiHa、C33A、Caski和MS751细胞及miR-21抑制剂(inhibitor)干预Hela细胞24 h后miR-21的表达;CCk-8法检测miR-21抑制剂(inhibitor)对H8、Hela、C4-I和Caski细胞增殖影响; Western blot检测miR-21抑制剂(inhibitor)对Hela和Caski细胞CyclinD1、CyclinE、CDK4、CDK6和CYLD表达的影响;qRT-PCR检测miR-21抑制剂(inhibitor)对Hela和Caski细胞CCND1、CCNE、CDK4、CDK6和CYLD mRNA的影响。结果 CC患者外周血HPV16、HPV18和miR-21含量明显高于健康志愿者,癌组织比癌旁组织高表达miR-21(P<0.05);CC患者组织和外周血中miR-21含量与HPV16、HPV18和肿瘤尺寸呈明显正相关(P<0.05);CC细胞系C4-I、C4-II、Hela、SiHa、C33A、Caski和MS751细胞比宫颈正常上皮细胞H8高表达miR-21;miR-21抑制剂(inhibitor)显著抑制Hela中高表达的miR-21且抑制Hela、C4-I和Caski细胞增殖(P<0.05),而不影响宫颈正常上皮细胞H8(P>0.05);miR-21抑制剂(inhibitor)显著抑制Hela和Caski细胞CyclinD1、CyclinE、CDK4蛋白和mRNA表达(P<0.05),上调CYLD蛋白和mRNA表达(P<0.05),对Caski细胞同时抑制CDK6蛋白和mRNA(P<0.05),而Hela细胞的CDK6蛋白和mRNA无明显影响(P>0.05)。结论 CC组织与癌旁细胞高表达miR-21,其通过抑制CYLD蛋白介导癌细胞周期阻滞促进细胞增殖。结果提示miR-21可能与CC发生发展有关,其可能成为与HPV16、HPV18相似的CC诊断指标,且参与肿瘤生长。
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单位武汉大学人民医院; 内蒙古自治区人民医院
