羽衣甘蓝类蛋白质二硫键异构酶PDIL1-2的基因克隆及蛋白表达分析

作者：李阳; 施亚坤; 高士科; 李晓屿; 蓝兴国^*

来源：植物研究, 2020, 40(02): 293-300.

• 羽衣甘蓝
• 类蛋白质二硫键异构酶
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 表达分析

以羽衣甘蓝(Brassica oleracea var. acephala)自交不亲和系(S13-bS13-b)为试材,利用RT-PCR和RACE的方法从柱头中分离类蛋白质二硫键异构酶Bo PDIL1-2基因。将Bo PDIL1-2编码区的序列构建到原核表达载体p ET-14b上,并转化到大肠杆菌中进行原核表达与纯化;用纯化后的蛋白免疫小鼠,制备Bo PDIL1-2多克隆抗体;通过免疫印迹法检测Bo PDIL1-2在不同组织及不同发育阶段柱头的表达情况。氨基酸序列比对分析结果显示,羽衣甘蓝Bo PDIL1-2与油菜Bn PDIL1-2、拟南芥At PDIL1-2的一致性分别是97. 3%和85. 5%。SDS-PAGE结果显示,在分子量58 k D处有Bo PDIL1-2蛋白特异性地诱导表达。免疫印迹结果显示Bo PDIL1-2在羽衣甘蓝柱头中特异表达,而且在柱头发育早期表达量较低,在开花期柱头表达量较高。

• 单位
  生命科学学院; 东北林业大学