鲤Pdcd6ip蛋白真核表达载体的构建及抗病毒功能研究

作者：邵玲^*; 张明辉; 彭军辉

来源：水生生物学报, 2022, 46(04): 529-536.

• 鲤春病毒血症病毒
• Pdcd6ip蛋白
• 过表达质粒
• 细胞活性
• 抗病毒
• 鲤

为进一步研究程序性细胞死亡6互作蛋白Pdcd6ip (Programmed cell death 6-interacting protein)分子功能,探讨其表达对鲤春病毒血症病毒(Spring viraemia of carp virus, SVCV)增殖的影响,研究通过逆转录-聚合酶链式反应扩增得到两端带有Nhe I和Eco R I酶切位点的pdcd6ip编码片段,并将其克隆至真核表达载体pCI-neo上,构建了真核表达质粒pCI-pdcd6ip。获得的过表达质粒转染至EPC细胞后进行RT-qPCR和western blot检测Pdcd6ip的表达情况,并利用CCK-8法检测其对细胞增殖的影响。细胞转染后24h进行SVCV感染,检测Pdcd6ip过表达对SVCV增殖的影响。结果显示, Pdcd6ip蛋白真核重组质粒能够在EPC细胞中大量表达,转染后72h细胞活性较对照组无显著差异。同时,免疫荧光、RT-qPCR和western blot检测结果均显示, Pdcd6ip蛋白过表达后, SVCV M蛋白mRNA水平和蛋白表达水平较对照组显著下降,表明Pdcd6ip过表达显著抑制了SVCV的增殖。研究为抗SVCV药物的研发提供了新的研究基础和设计思路。

• 单位
  上海市水产研究所