耐热嗜碱蛋白酶基因的克隆、表达及其酶学性质分析

作者：谢爱连; 林碧瑜; 牛丹丹^*; NOKUTHULA Peace Mchunu; 叶秀云

来源：食品工业科技, 2019, 40(20): 101-106.

DOI：10.13386/j.issn1002-0306.2019.20.017

• 地衣芽胞杆菌
• 耐热嗜碱性蛋白酶
• 克隆与表达
• 酶学性质

碱性蛋白酶是一类重要的工业酶制剂。为进一步提高碱性蛋白酶在高温碱性条件下的活力,增强其工业应用价值,本文从地衣芽胞杆菌CCTCC M2018539中首先通过PCR扩增获得碱性蛋白酶编码基因apr E539并克隆入表达载体pND-113中,在枯草芽胞杆菌WB600中实现碱性蛋白酶AprE539的表达;重组酶AprE539经硫酸铵沉降(30%～70%)、透析、DEAE阴离子交换和超滤获得纯酶,并以SDS-PAGE电泳测定AprE539的分子量大小。结果表明,AprE539的分子量大小为30 kDa。进一步对其酶学性质研究表明:AprE539的最适作用pH为11.0,最适作用温度为65～70℃;在pH6.0～12.0范围内具有较好的稳定性;在60℃保温1 h后酶活剩余70%; Cu2+、Mn2+、Ca2+和Mg2+对酶活有明显促进作用。AprE539在氨基酸序列上仅有2个氨基酸残基与碱性蛋白酶2709存在差异,但其酶学特征差异明显,为后续进一步探究其酶学性质差异性奠定基础。

• 单位
  福州大学