缺氧诱导因子-2α与MMP-2启动子结合位点的确定

作者：梁文辉; 原志庆; 王志慧; 李娜

来源：临床与实验病理学杂志, 2018, 34(01): 46-49.

DOI：10.13315/j.cnki.cjcep.2018.01.011

• 缺氧诱导因子2α
• MMP-2
• 缺氧反应元件
• MCF-7细胞

目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2(matrixmetallo proteinases-2,MMP-2)基因中缺氧反应元件(hypoxia-response element,HRE)的体外结合,并确定该结合位点。方法采用凝胶滞留电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)鉴定HIF-2α与MMP-2基因中HRE的体外结合;同时利用染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)进一步验证并确定该结合位点。结果成功预测2条MMP-2启动子区潜在的HIF-2α结合位点,分别为-217-204、-1 029-1 007;探针标记效率检测结果显示,正义链和反义链标记效率均为50%以上,可用于EMSA实验;结果显示,MMP-2启动子区存在HIF-2α的结合位点,位于-217-204。CHIP结果显示,实验组和对照组均扩增出约250 bp MMP-2启动子中含HRE区域的片段,提示HIF-2α蛋白与MMP-2启动子中的HRE区域存在活体内结合的关系。结论 HIF-2α与MMP-2基因中的HRE存在体内外结合。

• 单位
  新乡医学院; 新乡市中心医院