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摘要
目的:克隆骨形态发生蛋白BMP7基因并检测其在体外培养的兔关节软骨细胞中的表达。方法:从体外培养的幼兔膝关节软骨细胞中提取总RNA;按GenBankBMP7基因序列化学合成2条引物,采用RT-PCR方法得到BMP7基因;将BMP7基因片段插入到真核表达载体pcDNA3·1中,构建pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒;利用双酶切、PCR及核苷酸序列分析鉴定BMP7目的基因;将重组pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒转染家兔关节软骨细胞,分别采用原位杂交、PCR、Westernblotting法测定BMP-7表达。结果:克隆得到的BMP7基因核苷酸序列长约1300bp,构建的重组pcDNA3·1-BMP7真核表达载体质粒目的基因BMP-7序列与GenBank报道的BMP-7基因(No·BC008584)一致,转染了BMP7基因的体外培养的成年家兔膝关节软骨细胞表达了BMP7蛋白。结论:成功构建表达BMP7蛋白的转基因关节软骨细胞,其可用于细胞移植治疗或作为种子细胞构建组织工程软骨修复关节软骨缺损。
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单位药物研究所; 吉林大学中日联谊医院; 吉林大学; 哈尔滨医科大学附属第二医院
