沙门氏菌鞭毛蛋白重组乳酸乳球菌的构建及其免疫效果评价

作者：范真玮; 武静桥; 姚景丽; 陈婷; 何敬文; 赵微; 金天明^*

来源：黑龙江畜牧兽医, 2022, (01): 22-26.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.03.0326

• 乳酸乳球菌
• 沙门氏菌病
• 鞭毛蛋白
• 重组质粒
• 黏膜免疫

为了开发基于乳酸乳球菌载体表达的新型沙门氏菌口服疫苗,试验按照乳酸菌偏好优化密码子,将合成的截短的聚-γ-谷氨酸合成酶A(PgsA′)和截短的沙门氏菌鞭毛融合基因(Salmonella FliC)克隆到载体pUC57中,通过PCR和双酶切鉴定正确性;通过双酶切和T4连接插入目的基因到乳酸乳球菌表达载体pNZ8048中,构建重组质粒pNZ8048-PgsA′-FliC,通过PCR和双酶切鉴定正确性;提取质粒后将重组质粒利用电穿孔法转入乳酸乳球菌(Lactococcus lactis,L.lactis)NZ9000中,挑取阳性克隆,扩增培养后提取质粒,通过PCR和双酶切鉴定正确性;通过Western-blot检测外源基因在重组菌中的表达情况;对Balb/c小鼠口服免疫重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-PgsA′-FliC,以NZ9000/pNZ8048和PBS为对照,通过ELISA测定小肠黏液中特异性sIgA抗体表达水平。结果表明:成功构建了重组质粒pNZ8048-PgsA′-FliC与重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-PgsA′-FliC,并成功表达PgsA′-FliC蛋白,分子质量约为45 ku,重组蛋白在乳酸乳球菌细胞壁、破碎沉淀和破碎上清液均有表达。首免后10,20,30天,灌服乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048小鼠的FliC特异性sIgA水平均与灌服PBS的小鼠差异不显著(P>0.05)。首免后10,30天,灌服重组乳酸乳球菌NZ9000/pNZ8048-PgsA′-FliC小鼠的FliC特异性sIgA水平显著高于灌服PBS的小鼠(P<0.05);首免后20天,极显著高于灌服PBS的小鼠(P<0.01)。说明构建的重组乳酸乳球菌疫苗能引起动物产生特异性黏膜免疫。

• 单位
  天津农学院