灰葡萄孢对腐霉利的抗性分子机制及快速检测技术

作者：郑远; 沈瑶; 汪汉成^*; 戴德江; 沈颖; 吴鉴艳; 张传清^*

来源：农药学学报, 2021, 23(01): 90-96.

DOI：10.16801/j.issn.1008-7303.2020.0128

• 灰葡萄孢
• 腐霉利
• 抗药性机制
• 环介导等温扩增
• 抗性检测

为明确灰葡萄孢Botrytis cinerea对腐霉利的抗性现状,于2017—2018年采用单孢分离法从浙江省5个地区的草莓大棚共分离获得200个菌株。通过区分剂量法测定了其对腐霉利的抗性,对抗药性菌株的分子机制进行了分析,并根据抗药性分子机制,建立了B. cinerea腐霉利高抗基因型的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)检测技术。结果表明:浙江省草莓B. cinerea群体对腐霉利的抗性频率高达71.5%,以低抗菌株为主。抗药性菌株的BcOS1基因上存在3种类型的突变:第Ⅰ类为BcOS1基因第365位密码子由ATC突变为AGC,导致编码的氨基酸由异亮氨酸(Ile, I)突变为丝氨酸(Ser, S);第Ⅱ类为BcOS1基因第365位密码子由ATC突变为AAC,导致编码的氨基酸由异亮氨酸(Ile, I)突变为天冬酰胺(Asn, N)。这两类单点突变均导致B. cinerea对腐霉利表现低或中水平抗性。第Ⅲ类包含两个连锁的突变位点,第369位和第373位密码子分别由CAG和AAC突变为CCG和AGC,导致氨基酸分别由谷氨酰胺(Gln, Q)和天冬酰胺(Asn, N)突变成脯氨酸(Pro, P)和丝氨酸(Ser, S),使得B. cinerea对腐霉利表现高水平抗性。本研究所建立的LAMP检测技术可在63℃恒温条件下,在50 min内完成对腐霉利高抗菌株Q369P的检测,最低检测限为10×10-3 ng/μL,灵敏度是常规PCR的10倍。本研究结果可为腐霉利在草莓灰霉病防治上的科学使用及抗药性治理提供理论依据和技术手段。

• 单位
  贵州省烟草科学研究院; 浙江农林大学