微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体的构建表达及生物信息学分析

作者：白一童; 贾泽玮; 贾晓晖; 李瑞平; 贾天军^*

来源：中国病原生物学杂志, 2023, 18(02): 162-167.

DOI：10.13350/j.cjpb.230208

• 微小脲原体
• UP3-00830
• 原核表达
• 生物信息学分析

目的 构建微小脲原体UP3-00830基因原核表达载体，诱导表达蛋白并进行生物信息学分析。方法 通过PCR方法扩增UP3-00830基因。双酶切目的基因和载体质粒pGEX-6P-2,经T4连接酶连接，连接产物转化XL1-Blue感受态，经10 mmol/L IPTG诱导表达GST-UP3-00830融合蛋白，运用生物信息学软件预测UP3-00830基因编码的假设蛋白的功能。结果 成功构建了pGEX-6p-2-UP3-00830重组质粒，测序后与NCBI中录入的序列进行比对，同源性为99.85%。将重组质粒转染大肠埃希菌后经10 mmol/L IPTG诱导，表达相对分子质量为51×103的GST-UP3-00830融合蛋白，与预期相符。采用生物信息学软件分析UP3-00830基因编码的假设蛋白，其分子式为C1150H1846N302O356S4,理论相对分子质量为25.73×103,理论等电点(pI)为5.19,氨基酸数目为218,氨基酸组成中的赖氨酸(Lys)所占比例最高。含有α-螺旋、延伸链、无规则卷曲和β-转角，无跨膜区域和信号肽区域，第178-216位为卷曲螺旋区域。高级结构分析显示，UP3-00830基因编码的假设蛋白与蛋白库中1zxj.1相似性最高，为31.05%;结构及功能预测显示该蛋白具有蛋白转运和蛋白折叠的功能，与其相邻的蛋白分别为UU067、fecE(UU069)、hmuU-1(UU070)和ABCsbp-4(UU071)。结论 成功构建UP3-00830基因原核表达载体，并诱导表为51×103的目的蛋白，该蛋白可能参与物质转运和信号转导。

• 单位
  河北北方学院