马疱疹病毒1型TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

作者：胡月; 刘建华; 王雪竹; 车传忠; 吴桂灵; 加尔肯; 冉多良^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(12): 2345-2350.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.12.08

• 马疱疹病毒1型
• ORF68基因
• 荧光定量PCR
• TaqMan探针

为快速准确地检测马疱疹病毒1型(equine herpesvirus 1,EHV-1),本研究根据EHV-1基因组序列进化分析筛选出特异性较高的ORF68基因的保守区域设计引物与探针,建立了TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该方法线性关系良好,相关系数为0.999;灵敏度高,最低检测量为10.2拷贝/μL,比常规PCR敏感1 000倍;特异性强,检测EHV-2、EHV-4、EHV-5、马动脉炎病毒和马流感病毒均无交叉反应;重复性好,组内及组间样本检测的Ct值均小于等于2%;对2020年收集的60份伴有呼吸道症状的马匹鼻试子进行检测分析显示本方法的阳性检出率(26.67%)高于SYBR GreenⅠ荧光定量PCR(23.33%)和常规PCR(21.67%)。本研究建立了一种快速、灵敏、稳定、特异性强的TaqMan荧光定量PCR检测方法,可用于EHV-1的快速诊断和核酸定量检测,为EHV-1的防控工作提供了有力手段。

• 单位
  新疆农业大学