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摘要
目的:研究紫外线对人皮肤成纤维细胞的老化损伤及c-fos、c-jun、Sirt1蛋白在UVA诱导损伤后的变化。方法:原代培养人皮肤成纤维细胞,采用MTT法测定第5代细胞经不同强度、不同作用时间UVA照射后人成纤细胞的增殖情况,采用SA-β-Gal染色法观察细胞衰老情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶活性(GSH-Px)及金属基质蛋白酶-1(MMP-1)含量,免疫组化法观察细胞内c-fos、c-jun的表达,实时定量PCR法检测cfos、c-jun、Sirt1 mRNA的表达,Western blot检测c-fos、c-jun、Sirt1蛋白表达。结果:经5 J/cm2、10 J/cm2、20 J/cm2UVA照射72 h后,人皮肤成纤维细胞的增殖能力减弱,人皮肤成纤维细胞在UVA照射下普遍被诱导成衰老状态,经SA-β-Gal染色后观察到细胞衰老明显,不同强度UVA照射能明显降低细胞内SOD、GSH-Px活性,显著提高MMP-1的含量。免疫组化结果显示c-fos、c-jun表达呈阳性,同时c-fos、c-jun、Sirt1的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。结论:UVA能诱导人皮肤成纤维细胞形态改变,这一过程与紫外线强度及作用时间相关,经照射后c-fos、c-jun、Sirt1的表达明显升高,启动了光老化的进程。
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