糖原合酶激酶3β抑制剂TDZD-8对急性肝细胞损伤中自噬及NLRP3炎性小体的影响

作者：张丹眉; 石春霞; 龚作炯^*

来源：医学研究杂志, 2023, 52(10): 31-36.

• 糖原合酶激酶3β
• NLRP3炎性小体
• 自噬
• 急性肝衰竭

目的 探讨糖原合酶激酶3β(glycogen synthase kinase 3β,GSK3β)抑制剂TDZD-8在急性肝细胞损伤衰竭模型中对细胞自噬及NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor family pyrin domain-containing 3,NLRP3)炎性小体的影响。方法 体外培养人正常肝细胞L02细胞，CCK-8法测定不同浓度TDZD-8对L02细胞活性的影响；将细胞分为3组(对照组、模型组、TDZD-8组),经处理后，试剂盒检测细胞上清液中游离DNA(cell-free DNA,cf-DNA)及乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)含量；免疫荧光法检测3组细胞第9位丝氨酸磷酸化的GSK3β(p-GSK3β,Ser9)表达含量；Western blot法检测3组细胞中NLRP3、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)、IL-1β、UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK-1)、Beclin1及p62蛋白水平变化。结果 CCK-8结果显示，在TDZD-8浓度≤20μmol/L时药物对细胞活性无明显影响。3组细胞经处理后，与对照组比较，模型组p-GSK3β(Ser9)荧光强度明显减弱，GSK3β被激活，同时上清液中cf-DNA和LDH水平明显升高，NLRP3、IL-18和IL-1β蛋白水平也明显升高，而自噬相关蛋白ULK1和Beclin1蛋白水平明显下降，p62水平升高，自噬水平受到抑制(P<0.05)。经TDZD-8处理后，与模型组比较，细胞p-GSK3β(Ser9)荧光强度明显增强，上清液中cf-DNA和LDH水平显著降低，NLRP3、IL-18和IL-1β蛋白水平也明显降低，而自噬水平显著升高(P<0.05)。结论 TDZD-8在急性肝细胞损伤衰竭的模型中能够抑制NLRP3炎性小体活化同时激活细胞自噬起到保护作用。

• 单位
  武汉大学人民医院