腺苷酸激活蛋白激酶激活参与促进慢性缺氧时心肌细胞存活

作者：李畑波; 鞠胜杰; 蹇朝; 李经纬; 唐富琴; 肖颖彬

来源：第三军医大学学报, 2015, 37(08): 797-803.

DOI：10.16016/j.1000-5404.201411089

• 腺苷酸激活蛋白激酶
• 慢性缺氧
• 心肌细胞

目的检测腺苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)在慢性缺氧心肌组织中的激活水平,探讨AMPK激活对慢性缺氧心肌细胞存活的影响及其意义。方法选择本科2013年行手术矫治的先心病患儿24例,其中紫绀型先心病患儿12例,非紫绀型先心病患儿12例,取手术中切除的右室流出道心肌组织作为标本;选用46周龄清洁级雄性SD大鼠24只,分为常氧组和缺氧组(n=12)。将缺氧组置入低压舱(模拟海拔5 000 m,气压405 mm Hg),常氧组正常饲养。同时喂养28 d后,处死大鼠后迅速取出心脏并分离出右心室部分作为标本。采用Western blot分别检测p-AMPK在人体、大鼠缺氧心肌组织中的激活水平。选用H9c2心肌细胞株,并将其分为常氧组、低氧组、阻断组、激活组。将后3组细胞置入缺氧培养箱3 d(94%N2,5%CO2,1%O2),建立H9c2心肌细胞株慢性缺氧模型;常氧组置入细胞培养箱3 d,对照培养。分别向阻断组和激活组中加入AMPK特异性阻断剂Compound C和激活剂AICAR,采用Western blot检测p-AMPK的表达,流式细胞仪、TUNEL法检测心肌细胞凋亡,Hoechst33528染色观察细胞核形态、LDH测定心肌细胞死亡率。结果 Western blot结果显示与常氧组相比,缺氧心肌组织中p-AMPK/AMPK比值明显增高。与低氧组比较,AMPK阻断组凋亡细胞比例升高,TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均明显升高(P<0.05,P<0.01);AMPK激活组与低氧组比较,凋亡细胞比例、TUNEL-阳性细胞比例、不正常核比例、细胞死亡率均有降低(P<0.05)。结论在慢性缺氧条件下,AMPK蛋白磷酸化水平增强,p-AMPK对心肌细胞慢性缺氧适应具有一定保护作用。

• 单位
  第三军医大学新桥医院