TBX18腺病毒载体体外诱导乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化

作者：李艳君; 杨媚; 张格格; 李乐; 唐艳红

来源：中国心脏起搏与心电生理杂志, 2016, 30(06): 531-535.

DOI：10.13333/j.cnki.cjcpe.2016.06.015

• 心血管病学
• TBX18转录因子
• 腺病毒载体
• 乳鼠心肌细胞
• 生物起搏

目的观察TBX18腺病毒载体在体外转染乳鼠心肌细胞,能否诱导其向起搏样细胞分化。方法胰酶和Ⅱ型胶原酶混合消化法分离培养乳鼠心肌细胞,光学显微镜下观察细胞形态,48h后用免疫荧光技术检测心肌细胞纯度。将心肌细胞随机分为实验组(TBX18组)、空病毒对照组(GFP组),转染时分别加入带TBX18转录因子和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒,带GFP的腺病毒,采用实时荧光定量聚合酶链式反应,蛋白质免疫印迹和免疫荧光技术检测各组心肌细胞HCN4mRNA和HCN4蛋白的表达。结果培养24h后,心肌细胞几乎完全贴壁,可见梭形、菱形或多边形;48h后形成网状或放射状细胞簇。α-actin检测心肌细胞纯度高达96%。TBX18组心肌细胞中HCN4mRNA和HCN4蛋白的表达水平明显高于GFP组(28 943.997±5 019.682vs 1.000±0.000,n=9,P<0.05;0.631±0.025vs 0.192±0.003,n=9,P<0.05);倒置荧光显微镜下观察TBX18组因表达HCN4蛋白而发出红色荧光,GFP组几乎看不到HCN4蛋白的表达。结论 TBX18腺病毒载体体外转染乳鼠心肌细胞,能使乳鼠心肌细胞向起搏样细胞分化。

• 单位
  武汉大学; 武汉大学人民医院