RNA干扰YAP基因对人膀胱癌T24细胞株增殖和迁移能力的影响

作者：胡光辉; 徐亮; 赖鹏; 郭锥锋; 刘欢; 刘敏; 王云; 姚旭东; 许云飞

来源：中国癌症杂志, 2014, 24(06): 406-411.

• 膀胱癌
• Yes相关蛋白
• RNA干扰技术
• 细胞增殖
• 细胞迁移

背景与目的:膀胱尿路上皮癌是泌尿统系最常见的肿瘤,术后易复发及转移,Yes相关蛋白(Yes associated protein,YAP)基因与膀胱癌关系密切,本研究探讨通过RNA干扰技术沉默膀胱癌T24细胞中YAP基因的表达,观察YAP基因沉默后对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。方法:用阳离子脂质体转染试剂LipofectamineTM2000将靶向沉默YAP基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)序列转染至膀胱癌T24细胞株中,采用实时定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测转染后T24细胞中YAP基因及蛋白的表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、Transwell迁移试验以及划痕实验观察siRNA在体外对人膀胱癌T24细胞增殖、迁移能力的影响。结果:转染siRNA后,YAP RNA和蛋白表达量同空白对照以及阴性对照组相比被显著抑制(RNA:F=93.91,P<0.000 1;蛋白:F=4.62,P<0.05),CCK-8增殖活性实验结果显示,RNAi干扰YAP表达可以显著抑制膀胱癌T24细胞的增殖活性(12 h:F=6.00,P=0.037;24 h:F=41.72,P=0.000 3;36 h:F=462.8,P<0.000 1;48 h:F=236.6,P<0.000 1;72 h:F=140.5,P<0.000 1),通过Transwell实验和划痕试验发现,RNAi干扰YAP表达显著抑制膀胱癌T24细胞的迁移能力(Transwell:F=43.55,P<0.05;划痕:F=43.55,P<0.05)。结论:YAP基因是膀胱肿瘤增殖及迁移的重要调控因子。

• 单位
  同济大学; 上海市第十人民医院