MIR-122慢病毒表达载体构建及稳定转染HepG2细胞系

作者：张旭; 于芳; 聂勇战; 唐红卫; 梁琳琳; 陈蕊蕊

来源：现代生物医学进展, 2012, (10): 1849-1852.

DOI：10.13241/j.cnki.pmb.2012.10.049

• microRNA
• mir-122
• 慢病毒表达载体
• 稳定转染
• HepG2细胞 microRNA
• mir-122
• Lentiviral vector
• Stable transfection
• HepG2 cells

目的:构建人mir-122慢病毒表达载体,感染肝癌细胞HepG2,建立稳定表达mir-122的HepG2细胞系。方法:以人has-mir-122成熟序列,设计并合成引物,采用PCR的方法扩增目的基因,并连接到慢病毒表达质粒pGCSIL-GFP(含绿色荧光蛋白GFP基因)中。对重组质粒进行双酶切鉴定后,进行mir-122基因慢病毒(pGCSIL-GFP-miR-122)的包装及病毒滴度测定,用构建好的慢病毒表达载体感染HepG2细胞,qPCR检测感染后细胞中MIR-122的变化。通过流式细胞仪检测荧光蛋白GFP,westernblot检测mir-122靶分子CAT-1,验证pGCSIL-GFP-...

• 单位
  第四军医大学