阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶基因缺失突变株的构建及其生物学特性

作者：石会玲; 周宇航; 何平; 黄蒙蒙; 邵帅; 葛菁萍; 凌**^*

来源：中国农学通报, 2021, 37(23): 29-37.

• 阴沟肠杆菌
• 乳酸脱氢酶
• 自杀质粒
• 同源重组
• 基因敲除

旨在应用自杀质粒重组技术,构建阴沟肠杆菌乳酸脱氢酶突变株,为进一步提高乙偶姻的产量和扩大菌株选择范围奠定基础。利用双酶切的方法将同源片段插入到自杀质粒p KR6K中,构建出ldh基因敲除质粒,然后利用细菌接合的方法敲除E. cloacae的ldh基因。成功克隆出两段E. cloacae乳酸脱氢酶基因的同源序列,长度分别为526 bp,通过序列比对分析,E. cloacae乳酸脱氢酶基因序列相似性为100%。通过对E. cloacae进行乳酸脱氢酶基因的敲除,成功构建一株ldh缺失重组菌株E. cloacae△ldh,同时2,3-丁二醇提高6.8%,乙酸提高了24.3%。E. cloacae乳酸脱氢酶缺失工程菌株构建成功,对利用微生物法工业化生产乙偶姻奠定基础。

• 单位
  黑龙江大学; 生命科学学院