过表达Fad24使猪DFAT细胞在成脂诱导条件下转向成骨分化

作者：袁婷婷; 徐海翔; 徐琨; 何西建; 宋学雄^*

来源：中国兽医学报, 2023, 43(12): 2576-2582.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2023.12.25

• 过表达Fad24
• DFAT细胞
• 成脂
• 成骨
• 分化
• 猪

旨在探索过表达Fad24基因对猪DFAT细胞诱导成脂分化的影响。根据猪Fad24基因序列设计引物，克隆猪Fad24基因的全长CDS区片段，构建猪Fad24过表达载体，通过测序比对碱基和氨基酸序列，通过脂质体瞬时转染技术，将过表达Fad24载体转染猪DFAT细胞，从mRNA水平验证了Fad24基因在猪DFAT细胞中的过表达水平，然后将过表达Fad24的猪DFAT细胞在体外诱导成脂分化，从形态学、Fad24、成脂和成骨分化核心转录因子表达水平上进行了检测。结果表明，猪Fad24过表达载体碱基序列一致性高达99.8%,氨基酸序列一致性高达100%;过表达Fad24的猪DFAT细胞Fad24的表达量高出正常猪DFAT细胞表达量约45倍；成脂分化诱导5 d时，与对照组的正常分化比较，过表达Fad24的猪DFAT细胞成脂分化完全被抑制，相反强力转向成骨分化，细胞积聚成许多小结节，诱导7 d时已形成典型的成骨样大结节，表面可见细胞分泌物；经茜素红染色鉴定，证实细胞分泌物中含有矿化物质沉淀；经Real-time PCR检测，证实过表达Fad24试验组显著下调成脂分化核心转录因子PPARγ2、SREBP-1c(P<0.05)和显著上调成骨分化核心转录因子Runx2的表达(P<0.01)。结果提示，过表达Fad24通过调控成脂和成骨核心转录因子，完全抑制猪DFAT细胞成脂分化，并强力促进向成骨分化转化。

• 单位
  青岛农业大学