EGFP-Arg7融合蛋白表达及在HeLa细胞中的转导活性

作者：肖伟; 华迪; 汪雅雯; 单含文; 吕稼锋; 赵健

来源：食品与药品, 2010, (05): 158-161.

• 多聚精氨酸
• 蛋白转导域
• HeLa细胞 polyarginine
• protein transduction domain(PTD)
• HeLa cell

目的构建pET-28a-EGFP-Arg7重组子,观察表达的融合蛋白EGFP-Arg7在细胞内的转导活性。方法构建EGFP-Arg7(阴性对照为EGFP)序列,与pET-28a连接后,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,并经Ni2+-NTA纯化。纯化产物作用于HeLa细胞后用荧光显微镜观察其转导活性。结果重组pET-28a-EGFP-Arg7经酶切鉴定和序列分析,证明构建正确。转化E.coli BL21(DE3)后,重组蛋白获得可溶性表达。纯化后的融合蛋白纯度达90%以上。重组蛋白EGFP-Arg7作用于HeLa细胞后用荧光显微镜可观察到强绿色荧光。结论 Arg7具有很好的...

• 单位
  生物反应器工程国家重点实验室; 华东理工大学