β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活中的作用

作者：郑菲; 王轶芃; 张宗泽; 陈凯; 王焱林; 詹佳

来源：中华麻醉学杂志, 2016, 36(07): 855-859.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-1416.2016.07.021

• 抑制蛋白类
• 胆碱能拮抗剂
• 内毒素类
• 肺
• 毛细血管
• 内皮细胞
• 细胞外信号调节MAP激酶类
• JNK丝裂原活化蛋白激酶类

目的探讨β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活中的作用。方法将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法,将其分为5组(n=20):空质粒转染组(C组)、LPS+空质粒转染组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+LPS+空质粒转染组(P+LPS组)、LPS+β-抑制蛋白-1短发夹RNA(shRNA)转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+LPS+β-抑制蛋白-1 shRNA转染组(P+LPS+shRNA组)。以空质粒1.5μg或含15 nmol/Lβ-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞后,孵育24 h时,LPS组和LPS+shRNA组加入终浓度为0.1μg/ml的LPS孵育1 h;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1 h时加入终浓度为0.1μg/ml的LPS孵育1 h。采用流式细胞仪检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达水平,采用免疫荧光化学法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达水平,采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平。采用RT-PCR法检测β-抑制蛋白-1 mRNA表达水平。结果与C组比较,LPS组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调,P+LPS组细胞p-ERK1/2和p-JNK表达上调(P<0.05),其余指标表达差异无统计学意义(P>0.05);与LPS组比较,P+LPS组细胞F-aetin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达上调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达下调,LPS+shRNA组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调,MLCK和p-JNK的表达上调(P<0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组细胞F-actin、VE-eadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调(P<0.05)。结论盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活的机制部分与β-抑制蛋白-1表达上调有关。

• 单位
  武汉大学中南医院