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摘要
半胱氨酸蛋白酶3(caspase 3, CASP3)是半胱氨酸蛋白酶家族(caspase, CASP)中的重要成员，处于细胞凋亡有序级联反应下游，是多种凋亡刺激信号传递的汇聚点，其活化也成为凋亡进入不可逆阶段的标志。然而，目前有关CASP3基因在绵羊乳腺炎发生过程中的调控机制尚不清楚。因此，本试验以湖羊作为试验动物，基于课题组前期转录组测序获得的湖羊CASP3基因CDS序列，采用生物信息学方法对其编码蛋白的理化性质、结构以及不同物种之间的同源性等进行了分析，并利用RT-qPCR、Western blot和免疫组织化学染色方法检测了CASP3基因在健康和患临床型乳腺炎湖羊乳腺组织中的表达与定位特征差异。生物信息学分析显示湖羊CASP3蛋白为亲水性稳定蛋白，其蛋白结构无跨膜区，属于非分泌蛋白，在进化过程中具有高度保守性。RT-qPCR与蛋白免疫印迹结果显示，在健康和临床型乳腺炎乳腺组织中均存在CASP3基因的表达，且临床型乳腺炎乳腺组织中CASP3 mRNA和蛋白的相对表达量极显著(P<0.01),高于健康组。免疫组织化学结果显示CASP3蛋白在健康乳腺组织中主要分布于乳腺上皮细胞中，而在临床型乳腺炎乳腺组织中主要分布于基质细胞和乳腺上皮细胞。提示CASP3 mRNA和蛋白在临床型湖羊乳腺组织中表达均上调，这为进一步研究CASP3基因在绵羊乳腺炎发病机制中的调控作用提供基础信息。
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