路邓葡萄球菌单宁酶基因的克隆、表达、纯化与改造

作者：刘鳐; 胡雪丽; 钟秋梅; 吕蝶; 吴明波^*

来源：中国测试, 2018, 44(09): 63-68.

• 路邓葡萄球菌
• 单宁酶
• 三明治结构
• 定点突变
• 没食子酸甲酯

为提高路邓葡萄球菌(Staphylococcus lugdunensis)单宁酶(Sl-tan)的活性,该文利用化学合成方法获得Sltan基因,将该基因连接到重组表达质粒pET43.1-A,再转化到大肠杆菌感受态细胞BL21-DE3中进行表达,通过亲和层析柱纯化,以没食子酸甲酯为底物进行酶活性测定以及酶学性质分析,并基于生物信息学分析,结合定点突变技术对Sl-tan进行人工改造。结果显示,获得的重组单宁酶产量明显增高,最高可达42 mg/L发酵液;酶学性质研究显示该酶在pH 8.0,温度40℃时获得的活性最高(40 U/mg);Ala460突变为Pro460后的Sl-tan活性可提高82.5%。

• 单位
  成都医学院