microRNA-210基因修饰人脐静脉内皮细胞诱导血管形成

作者：娄远蕾; 高法梁; 谢安; 郭菲; 邓志锋; 汪泱

来源：中国修复重建外科杂志, 2012, 26(05): 587-591.

• microRNA-210
• 人脐静脉内皮细胞
• 血管再生
• 慢病毒载体

目的构建人microRNA-210(miR-210)慢病毒重组载体并转染人脐静脉内皮细胞株(human umbilical vein endothelial cells 12,HUVE-12),探讨其过表达对HUVE-12成血管的影响,为研究血管再生机制提供实验模型。方法构建pGCSIL-GFP-pre-miR-210重组质粒表达载体并转染HUVE-12,荧光显微镜观察GFP阳性表达细胞数及实时荧光定量PCR法检测miR-210表达变化;细胞分为空病毒对照组(LV-GFP对照组)和miR-210转染组(LV-miR-210-GFP组),流式细胞仪检测各组细胞ephrinA3表达变化;ELISA检测细胞培养上清中VEGF含量;将两组细胞分别接种于Matrigel观察血管形成能力。结果重组载体经酶切、测序鉴定正确,GFP表达强度在转染后48～72 h达峰值;实时荧光定量PCR检测结果显示:LV-miR-210-GFP组miR-210表达水平较LV-GFP对照组增加9.72倍(t=—11.10,P=0.00)。流式细胞仪检测结果显示LV-miR-210-GFP组ephrinA3阳性细胞率为12.52%±0.67%,明显较LV-GFP对照组(73.22%±1.45%)降低(t=—66.12,P=0.00);ELISA检测结果显示LV-miR-210-GFP组细胞上清中VEGF含量显著高于LV-GFP对照组([305.29±16.52)pg/mL vs.(42.52±3.11)pg/mL](t=—27.06,P=0.00);血管形成能力实验显示LV-miR-210-GFP组毛细血管管腔数为17.33±6.33,较LV-GFP对照组(6.33±2.33)显著增加(t=—2.83,P=0.04)。结论成功构建miR-210慢病毒重组载体,并能在HUVE-12中稳定表达,过表达miR-210能明显增强HUVE-12血管形成能力,为进一步研究miR-210调控血管新生的分子机制奠定了实验基础。

• 单位
  南昌大学; 南昌大学第二附属医院