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摘要
目的检测p53和DNA损伤调控基因1(PDRG1)在结直肠癌细胞中的表达, 探讨PDRG1在结直肠癌细胞增殖、侵袭及迁移过程中的作用及其机制。方法实时定量反转录聚合酶链反应法(RT-qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测结肠癌(SW620)和正常结肠(NCM460)2种细胞中PDRG1 mRNA及蛋白的表达。转染PDRG1过表达载体和小干扰RNA(siRNA)感染序列至SW620细胞, 实验分为3组, 过表达转染组, 阴性转染对照组, 抑制组。Western blot检测PDRG1、锌指蛋白转录因子1(Snail1)、上皮型钙黏附蛋白(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)蛋白的表达。细胞计数试剂盒(CCK-8), Transwell小室检测细胞增殖、迁移及侵袭能力。检测转染Snail1 siRNA感染序列对过表达PDRG1 SW620的影响。计数数据采用χ2检验或者Fisher′s精确检验, 采用t检验比较各组间差异。结果 PDRG1 mRNA和蛋白在SW620的相对表达量分别为1.853±0.118、1.563±0.064, 明显高于NCM460中的1.00±0.00、1.00±0.00(t=12.51、15.08, P<0.01)。SW620细胞转染PDRG1过表达载体后mRNA和蛋白的相对表达量较对照组(t=20.073、16.842, P<0.01)明显升高, 转染72 h后细胞增殖水平高于对照组(t=4.857, P<0.01), 侵袭和迁移细胞数122.3±18.1、174.6±13.2, 较对照组99.5±16.2、110.5±12.2明显增加(t=2.956、11.271, P<0.01)。Snail1、Vimentin的表达明显升高(t=9.756、10.950, P<0.01), E-Cadherin的表达明显降低(t=-6.060, P<0.01)。SW620细胞转染PDRG1 siRNA后mRNA和蛋白的表达较对照组明显降低(t=8.072、12.704, P<0.01), 转染48、72 h后增殖水平低于对照组(t=5.557、-4.782, P<0.01), 侵袭和迁移细胞数(30.8±8.6、37.5±8.9), 较对照组(117.6±12.8、126.9±11.9)明显降低(t=-17.734、-18.873, P<0.01)。Snail1、Vimentin蛋白的表达明显降低(t=-7.588、-7.187, P<0.01), E-Cadherin的表达明显升高(t=13.239, P<0.01)。转染Snail1 siRNA感染序列逆转了PDRG1调节的上皮-间充质化(EMT)过程和细胞迁移和侵袭。结论 PDRG1可通过调控Snail1的表达来影响EMT过程, 从而促进肿瘤细胞的增殖, 侵袭和迁移。
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