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摘要
大肠杆菌及其致病菌株是生鲜肉中的主要污染菌株,对其检测和控制是保证肉品质量的关键。本研究拟构建基于选择性快速增菌和多重PCR的生鲜肉中产毒素大肠杆菌检测方法。以大肠杆菌种属特异基因uidA、ETEC不耐热肠毒素基因lt和耐热肠毒素基因sta为PCR靶基因,通过引物特异性筛选,ETEC选择性增菌和分离,PCR反应条件优化等手段,对不同肉样中的ETEC进行检测。结果显示:25μL PCR反应体系,退火温度为60℃,引物添加量为0.8μL (10μmol/μL)时,PCR多重扩增稳定性和特异性最佳。经LST肉汤选择增菌和伊红美蓝鉴别平板分离,肉样中ETEC的最低检测限值为4 CFU/10 g。本研究建立的方法操作简便,稳定性、特异性强,可用于生鲜肉中ETEC的快速检测。
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