人鸟苷酸结合蛋白5基因启动子核心调控区域的鉴定及其转录活性分析

作者：叶婷; 杨康; 王田甜; 廖玉娇; 杜文倩; 黄敏; 蒋佩文; 李敏惠^*; 杨平^*

来源：中国生物制品学杂志, 2023, 36(02): 138-144.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003819

• 鸟苷酸结合蛋白5
• 启动子
• 荧光素酶报告基因
• 阴阳转录因子1

目的 构建人鸟苷酸结合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因启动子不同长度截短片段的荧光素酶报告基因质粒，通过分析启动子不同截短片段的转录活性，确定其核心调控区域。方法 PCR扩增GBP5基因启动子序列，将启动子序列截短为5个不同长度的片段，连接至载体pGL3-basic，构建重组质粒pGL3-GBP5-11/21/31/41/51。将各重组质粒转染至293FT细胞，检测荧光素酶活性；利用JASPAR软件预测GBP5启动子区域的转录因子结合位点，依据预测结果选取靶向核心调控区域的阴阳转录因子1(Yin-Yang transcription factor 1,YY1)进行转录调控活性验证；PCR扩增YY1的CDS序列，构建过表达质粒pIRES2-EGFP-YY1；将pIRES2-EGFP-YY1、pGL3-GBP5-21(-1 623～+47 bp)质粒与内参质粒pRL-CMV共转染至293FT细胞，检测荧光素酶活性，分析转录因子YY1对GBP5启动子活性的调控作用。结果 菌落PCR、双酶切鉴定证明人GBP5基因启动子报告基因质粒构建正确；JASPAR软件预测GBP5启动子区域存在STAT1、YY1、Foxp3等多个转录因子结合位点；双荧光素酶活性检测结果显示，pGL3-GBP5-21(-1 623～+47 bp)启动子活性最高，而pGL3-GBP5-41(-520～+47 bp)启动子活性明显降低，提示GBP5启动子核心区域位于5’UTR上游-1 623～-520 bp区域；过表达YY1能明显激活GBP5启动子活性，调控GBP5表达。结论人GBP5基因启动子的核心调控区域位于GBP5启动子5’UTR上游-1 623～-520 bp区域，该区域存在转录因子YY1结合位点，YY1过表达能显著影响GBP5启动子活性。

• 单位
  成都医学院; 基础医学院