地龙（参环毛蚓）配方颗粒的位点特异性PCR鉴别

作者：胡力; 赵玉洋; 袁媛^*; 蒋超^*

来源：中国实验方剂学杂志, 2022, 28(17): 119-126.

DOI：10.13422/j.cnki.syfjx.20221211

• 地龙(参环毛蚓)
• 配方颗粒
• 聚合酶链式反应

目的：为保障临床用药的安全性和有效性，建立地龙（参环毛蚓）药材及其加工制品混伪、掺假特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴定方法。方法：根据地龙氧化酶亚基1(COⅠ)基因序列筛选出地龙配方颗粒的稳定引物区间，并根据区间内筛选获得地龙的特异性单核苷酸多态性（SNP）位点，根据SNP位点设计地龙特异性鉴别引物dlshmy-F及dlshmy-R，分别采集地龙及其混伪品，建立地龙配方颗粒特异性PCR鉴别方法并优化PCR反应体系，对该方法进行耐受性和适用性考察。结果：退火温度为62℃，循环次数为36次，地龙及其配方颗粒经PCR反应及凝胶电泳后，可在约170 bp处观察到单一明亮的特异性鉴别条带，其他近源伪品如通俗环毛蚓、保宁腔蚓、栉盲环毛蚓等20种伪品及阴性对照均无条带。结论：该研究建立的特异性PCR鉴别方法可快速准确的鉴别出地龙药材、配方颗粒、冻干粉中的参环毛蚓源性成分，准确鉴定出全国广地龙中药材及饮片以及地龙的基原，也可为其他的中药配方颗粒质量标准研究提供了参考。

• 单位
  道地药材国家重点实验室; 中国中医科学院; 安徽中医药大学