重组sTNFα-R1蛋白同义密码突变库的构建及筛选

作者：何静; 丛聪; 代云见; 李坤; 王明蓉

来源：中国生物工程杂志, 2013, (10): 96-102.

DOI：10.13523/j.cb.20131014

• 重组肿瘤坏死因子-α受体1
• 同义密码突变库
• 蛋白产量 Recombinant sTNFα-R1 protein
• Synonymous mutation library
• Productivity of the recombinant protein

目的:以重组肿瘤坏死因子-α受体1(sTNFα-R1)的基因序列为模板,构建同义密码突变库,在不改变原氨基酸序列的同时筛选获得目标蛋白产量提高的突变菌株。方法:分段设计并合成同义密码突变兼并引物,通过优化PCR反应条件,构建目的基因的完整同义密码突变库。突变库经双酶切插入到pET11(b)载体上,并电转至E.coli BL21(DE3)细胞中。阳性克隆经PCR鉴定后,细胞表达目标蛋白,应用SDS-PAGE等方法分析目标蛋白产量。结果:目的基因同义突变库的PCR扩增产物可见330bp的特征条带,突变库测序结果显示整个基因序列的第三位碱基发生预期的同义突变;完成了445株克隆筛选,针对其中产量高于...

• 单位
  中国医药集团总公司四川抗菌素工业研究所; 成都生物制品研究所有限责任公司