缺血预处理脑血管内皮细胞分泌的外泌体对氧葡萄糖剥夺神经元的保护作用

作者：许丽丽; 张尧; 杜明洋; 蓝文雅; 邱峰; 曹辉^*

来源：国际脑血管病杂志, 2020, 28(08).

• 缺血预处理
• 外泌体
• 神经元
• 内皮细胞
• 氧
• 葡萄糖
• 细胞, 培养的

目的探讨缺血预处理(ischemic preconditioning, IPC)脑血管内皮细胞bEnd.3分泌的外泌体(exosome, Exo)对氧葡萄糖剥夺(oxygen and glucose deprivation, OGD)神经元的影响。方法将bEnd.3暴露于OGD 3 h模拟体内IPC, 复氧48 h后提取条件培养液中的外泌体(IPC Exo), 采用蛋白质印迹分析和透射电镜方法进行鉴定Exo。将IPC Exo与原代培养的小鼠大脑皮质神经元共同孵育24 h, 共聚焦显微镜观察Exo能否被原代培养的小鼠大脑皮质神经元摄取。将原代培养的小鼠大脑皮质神经元分为对照组、OGD组、OGD+IPC Exo(5μg/ml、10 μg/ml、20 μg/ml)组以及Sham OGD组(常氧条件培养的bEnd.3分泌的Exo进行处理), 采用CCK-8和细胞存活/死亡检测试剂盒检测细胞活力。结果透射电镜观察显示, bEnd.3培养液提取物呈现Exo典型形态, 即直径30～100 nm的双凹圆盘状囊泡。蛋白质印迹分析显示, bEnd.3培养液提取物高度表达Exo标志物Alix和Tsg101。共聚焦显微镜观察显示, Exo可被原代培养的小鼠大脑皮质神经元摄取, 摄取的Exo广泛分布于胞质和突触。与OGD组比较, 加入10 μg/ml和20 μg/ml IPC Exo可显著提高神经元活力(P<0.05), 而加入Sham Exo则无神经保护作用。结论 IPC脑血管内皮细胞释放的Exo对OGD神经元具有保护作用。

• 单位
  南京医科大学