分子排阻色谱双检测器串联法测定聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子的聚乙二醇修饰度

作者：张苏; 张培彪; 刘忠; 张贵民^*

来源：中国生物制品学杂志, 2020, 33(09): 1061-1065.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003154

• 聚乙二醇化重组人粒细胞集落刺激因子
• 修饰度
• 分子排阻色谱法
• 紫外检测器
• 示差折光检测器
• 串联

目的建立分子排阻色谱紫外与示差折光检测器串联(molecular exclusion chromatography with ultraviolet and refractive index detectors in series,SEC-UV-RI-HPLC)法测定聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)化重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)的修饰度,并对方法进行验证。方法采用TSKgel G3000SWXL(300 mm×7.8 mm)凝胶色谱柱,以0.01 mol/L磷酸氢二钠-磷酸二氢钠-0.1 mol/L氯化钠(pH 7.0)为流动相,流速:0.5 mL/min,柱温:25℃,示差折光检测器温度:35℃,波长:280 nm,进样量:20μL。通过测定rhG-CSF中间体的UV、RI峰面积,PEG的RI峰面积,PEG-rhG-CSF原液的UV、RI峰面积等,计算出PEG修饰度。对建立的方法进行专属性、线性、精密性、耐用性验证。结果样品在0.2～1.0 mg/mL范围内线性关系良好(R2=0.999);精密性和耐用性试验相对标准偏差分别为1.54%和1.77%;专属性良好。结论建立的方法具有良好的专属性、线性、精密性及耐用性,操作简单,可用于测定PEG-rhG-CSF的修饰度。