A型塞内卡病毒VP2蛋白抗原区的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立

作者：翟刚; 顾文源; 王晶; 刘莹; 赵云环; 刘涛; 张帅; 左玉柱^*; 范京惠^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(10): 1025-1031.

• 猪
• A型塞内卡病毒
• VP2
• 间接ELISA

为建立高效的A型塞内卡病毒(SVA)的血清学检测方法，本研究经PCR扩增SVA VP2基因的优势抗原区域(VP2-1基因)后构建重组质粒p ET-32a-VP2-1，将其转化大肠杆菌感受态细胞并经IPTG诱导表达重组VP2蛋白(rVP2)，表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定，结果显示，在42 ku处出现特异性条带，表明r VP2可以与SVA阳性血清特异性反应。以r VP2为包被抗原，经反应条件的优化，建立了基于SVA VP2抗原区的间接ELISA抗体检测方法。本研究建立的间接ELISA检测方法的最适抗原包被浓度为2μg/mL,5%脱脂乳的PBST作为封闭液37℃孵育1 h，待检血清的最适稀释度为1∶500，兔抗猪Ig G-HRP稀释度为1∶10 000，最佳显色时间为10 min。当检测样品的S/P值<0.201时，样品检测结果为阴性；当检测样品的S/P值≥0.201时，结果为阳性。利用该方法检测SVA，猪伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪瘟病毒(CSFV)等阳性血清，结果显示，除SVA检测为阳性外，其他病毒均为阴性，特异性较强。将SVA阳性血清2倍倍比稀释(1∶50,1∶100,1∶200,1∶400,1∶800,1∶1 600)后经该间接ELISA方法检测，评估其敏感性，结果显示，SVA阳性小鼠血清在1∶800稀释后检测结果仍为阳性，敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r VP2包被ELISA板，按照该ELISA方法检测8份猪SVA阳性血清，评估该方法的重复性。结果显示，批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%，该方法重复性好。利用本实验建立的间接ELISA方法与血清中和试验同时对266份临床血清样品检测，结果显示，本研究建立方法检测的样品阳性率为19.1%，中和试验检测的样品阳性率为19.55%，两种方法检测结果符合率为97.7%。本研究首次基于SVA r VP2建立的间接ELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好，为SVA的检测和其感染的防控提供了可靠的技术支持。

• 单位
  华北电力大学（保定）; 河北农业大学