pAd-SIG腺病毒质粒构建及其在MCF-7细胞中的表达

作者：袁晓梅; **; 雷萍; 邢薇; 吴砂; 代维; 朱慧芬; 沈关心

来源：医学分子生物学杂志, 2007, 4(05): 414-418.

DOI：10.3870/j.issn.1672-8009.2007.05.009

• 人生长抑素受体2亚型
• 同源重组
• 腺病毒增强型绿色荧光蛋白

目的含人生长抑素受体2亚型(human somatostatin receptor subtype2,hSSTr2)和增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒重组质粒的构建及表达。方法采用PCR方法将hSSTr2以及IRES-EGFP基因亚克隆至穿梭质粒pShuttle-CMV中,获得pShuttle-CMV/hSSTr2-EGFP,经PmeⅠ酶切,去磷酸化后转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183菌,细菌内同源重组构建腺病毒质粒pAdeasy-1/hSSTr2-EGFP(pAd-SIG),将其转染HEK293细胞进行病毒包装与滴度测定。重组腺病毒感染MCF-7细胞,流式细胞术检测其表达。结果酶切、PCR及基因测序证实重组腺病毒质粒pAd-SIG构建成功,病毒滴度为8.2×109IU/ml,流式细胞术结果显示hSSTr2在MCF-7细胞中表达阳性率为86.59%。结论成功构建了重组腺病毒质粒pAd-SIG,并能在真核细胞表达,为体内外研究hSSTr2效应提供了基础。

• 单位
  华中科技大学同济医学院; 华中科技大学同济医学院附属协和医院