化脓隐秘杆菌间接免疫荧光方法的建立及应用

作者：刘威; 何深宏; 任绍科; 李小燕; 杨雪芬; 程方俊^*; 周作勇; 曹立亭

来源：湖南农业大学学报(自然科学版), 2020, 46(02): 230-235.

DOI：10.13331/j.cnki.jhau.2020.02.016

• 山羊
• 小鼠
• 化脓隐秘杆菌
• 高免血清
• 间接免疫荧光方法
• 特异性
• 灵敏度

通过制备兔抗化脓隐秘杆菌(Trueperella pyogenes)高免血清,筛选固定方法、封闭液、洗涤液、抗体稀释度、抗体孵育时间等应用条件,建立一种检测化脓隐秘杆菌的间接免疫荧光方法。结果表明:用冷丙酮作固定剂,10%山羊血清作封闭液,0.05%Tween–20的0.01 mol/L pH 7.4 PBS(磷酸缓冲盐溶液)作洗涤液,兔抗化脓隐秘杆菌高免血清(一抗)1∶50稀释,37℃作用2 h,羊抗兔FITC(二抗)1∶100稀释,37℃作用2 h,草酸铵结晶紫衬染菌体3 min,对纯培养物化脓隐秘杆菌检测,可见清晰的特异性荧光,能区分溶血隐秘杆菌、伪结核棒状杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、沙门氏菌、猪链球菌;在人工感染化脓隐秘杆菌死亡小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏及发病山羊临床病料中均能检出化脓隐秘杆菌。

• 单位
  西南大学; 动物科学学院