肠炎沙门菌鞭毛蛋白的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

作者：史冰田; 王高玲; 郭杰; 司微; 李涛; 王斌; 刘恒贵

来源：中国兽医科学, 2016, (01): 8-12.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2016.01.002

• 肠炎沙门菌
• 鞭毛蛋白
• 原核表达
• 阳性血清
• 生物活性 Salmonella enteritidis
• flagellin
• prokaryotic expression
• positive serum
• biologic activity

利用PCR技术成功扩增到了肠炎沙门菌鞭毛蛋白fliC基因,将其连接到原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a(+)-fliC。将pET-32a(+)-fliC转化到大肠杆菌BL21(DE3)菌株中,并在30℃下用终浓度为1mmol/L IPTG进行诱导表达9h。表达的重组蛋白通过镍离子亲和层析和分子筛的方法进行纯化,获得的蛋白用SDS-PAGE方法进行分析。对纯化的重组蛋白进行定量和内毒素测定后,用其免疫SPF鸡,制备超免疫血清。纯化的FliC蛋白与其受体之间的相互作用通过流式细胞仪进行分析。结果显示,成功扩增到了长度为1518bp的全长fliC基因,该基因编码的...

• 单位
  中国农业科学院哈尔滨兽医研究所; 兽医生物技术国家重点实验室; 福建农林大学; 动物科技学院