猪NOX1基因启动子区转录因子的筛选与鉴定

作者：汪亮; 李忠秋; 何鑫淼; 王文涛; 唐晓东; 刘娣; 张冬杰^*

来源：中国兽医学报, 2021, 41(11): 2268-2274.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2021.11.28

• 猪
• NOX1基因
• 启动子
• 调控因子

为了寻找调控猪NADPH氧化酶1(NOX1)基因转录的转录因子,本研究采用3′端固定,5′端逐渐截短的方法,扩增了NOX1基因的启动子区序列,并将它们分别连入双荧光素酶报告基因载体,转染PK15细胞后,检测双荧光素酶的相对活性。根据活性高低判定转录因子可能结合的位置,利用重叠PCR技术定点缺失转录因子的结合序列,再次连入报告载体后,根据荧光素酶活性的变化判定是否为NOX1基因真正的转录调控因子。结果发现,NOX1基因启动子区的-1 618～-1 bp区间存在转录调控因子的结合位点,对该区间开展2轮截短试验后,初步判定-1 149～-1 091 bp和-208～-115 bp区间存在正调控元件,-1 091～-1 052 bp区间存在负调控元件。针对上述3个区间,同时结合在线软件的预测结果,定向缺失了-1 104～-1 092 bp,-1 051～-1 043 bp,-1 043～-1 033 bp和-126～-116 bp小片段后,确定-1 104～-1 092 bp和-126～-116 bp区间存在正调控该基因转录的元件结合位点,分别为ZNF384、ELF-1和TBR1。本研究克隆了猪NOX1基因的启动子序列,对可能结合到该区间的转录因子进行了筛选与分析,为后续分析NOX1的转录调控机制,探讨其生物学功能奠定了基础。

• 单位
  黑龙江省农业科学院