鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体胞外段原核表达载体的构建及表达鉴定

作者：郑少江; 黄凤迎; 郑少萍; 王伟; 吴人亮

来源：华中科技大学学报(医学版), 2006, (04): 433-435+439.

• 成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体
• 肿瘤血管生成
• 原核表达
• 基因重组

目的构建重组原核表达载体以获得鸡成纤维细胞生长因子Ⅰ型受体(FGFR-1)胞外段活性蛋白,为进一步研制FGFR-1蛋白质肿瘤疫苗打下基础。方法利用RT-PCR技术,从鸡胚肝中扩增出鸡的FGFR-1胞外段基因的cD-NA,用内切酶消化后插入原核表达质粒pQE30中。经过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定后,体外转化大肠埃希菌,用RT-PCR和免疫印迹方法鉴定是否能够正确表达,同时利用Ni-NTA琼脂柱层析法纯化复性重组蛋白。结果琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定证实PCR扩增的cDNA及构建的重组原核表达质粒pQE30-FGFR-1正确,并在大肠埃希菌中正确表达。经纯化后,进行SDS-PAGE电泳显示得到1条分子量约40 ku的蛋白质条带。结论成功构建鸡FGFR-1胞外段原核表达载体并获得重组活性蛋白。

• 单位
  海南医学院; 华中科技大学同济医学院; 基础医学院