过表达TPL2蛋白PK-15细胞系的建立及其功能验证

作者：郝军红; 闫鸣昊; 张大俊; 张学刚; 申超超; 徐国伟; 李国丽; 张克山^*; 郑海学^*; 刘湘涛

来源：中国兽医学报, 2020, 40(07): 1319-1324.

DOI：10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.07.10

• TPL2基因
• PK-15细胞系
• FMDV
• SVV
• 慢病毒表达系统

通过基因合成的TPL2(tumor progression locus 2)质粒,获得稳定表达TPL2的PK-15/TPL2细胞系。将慢病毒载体Lv-PCDH和TPL2(Pig)重组慢病毒载体Lv-TPL2(Pig)利用转染试剂将其转染至PK-15细胞。感染48 h后,加入嘌呤霉素进行药物筛选,通过筛选得到的阳性细胞株PK-15/TPL2即为稳定表达TPL2蛋白的PK-15细胞株。通过qRT-PCR法和琼脂糖凝胶电泳、IFA,TCID50技术验证PK-15/TPL2细胞系和对口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)和猪塞内加谷病毒(seneca valley virus,SVV)病原复制的影响。结果显示,细胞表达大量的TPL2的基因产物,用FMDV、SVV病毒感染稳定表达TPL2的PK-15细胞株时,明显抑制病毒的复制。结果表明,利用该技术可高效快速地建立了稳定高表达TPL2的PK-15细胞系,该细胞株的建立为病毒的分离及TPL2的生物学活性研究奠定理论基础。

• 单位
  农业部; 中国农业科学院兰州兽医研究所; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室