转化生长因子-β3/胰岛素样生长因子-1联合基因转染诱导间充质干细胞成软骨细胞分化

作者：黄辉; 李海涛; 蔺媛媛; 李娅娟; 杨迭影; 夏晨蕾; 夏长所^*

来源：中华实验外科杂志, 2018, 35(03): 497-500.

• 骨髓间充质干细胞
• 软骨分化
• 转化生长因子-β3
• 胰岛素样生长因子-1

目的重组慢病毒介导转化生长因子(TGF)-β3/胰岛素样生长因子-1(HIGF-1)联合基因转染兔骨髓间充质干细胞,诱导其软骨细胞分化,比较与TGF-β3单基因转染诱导其软骨细胞分化的效率。方法全骨髓贴壁法分离、培养骨髓间充质干细胞,流式细胞术检测细胞表面抗原,培养后通过重组慢病毒分别转染阴性对照(N组)、TGF-β3单基因(T组)、TGF-β3/HIGF-1联合基因(TB组),培养14 d后,荧光显微镜下观察各组细胞形态,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot分别检测性别决定区Y框蛋白9(SOX9)、蛋白多糖、Ⅱ型胶原在基因水平与蛋白水平的表达量。结果流式细胞术检测造血干细胞标志物(CD34,2.07%)、白细胞表面抗原[人类白细胞抗原DR基因(HLA-DR),1.73%]均为阴性,透明质酸受体(CD44,82.79%)为阳性,荧光显微镜观察诱导后细胞形态多为多角形、方形或者类圆盘状;RT-PCR结果显示:T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原基因表达量为0.645±0.024、0.587±0.018、0.616±0.019,显著高于C组(0.192±0.012、0.241±0.021、0.273±0.015),N组(0.211±0.014、0.224±0.016、0.232±0.022)(P=0.000);TB组基因表达量为O.832±0.013、0.746±0.024、0·951±0.026,显著高于T组(P=0.000)。T组SOX9、蛋白多糖、Ⅱ型胶原蛋白表达量为1.36±0.20、0.39±0.05、0.68±0.09,显著高于C组(0.58±0.11、0.12±0.08、0.23±0.15),N组(0.62±0.14、0.13±0.06、0.25±0.02,P=0.000);TB组蛋白表达量为1.83±0.13、1.35±0.24、1.51±0.26,显著高于T组(P=0.000)。结论 TGF-β3/HIGF-1联合基因转染骨髓间充质干细胞能诱导其成软骨细胞分化,且联合基因转染效率高于TGF-β3单基因转染。

• 单位
  青岛大学附属医院; 青岛大学; 青岛市市立医院