组蛋白乙酰化/去乙酰化失衡对C2C12肌原细胞成肌分化的影响

作者：李一飞; 华益民; 方婕; 王川; 詹雅兰; 朱琦; 母得志; 周开宇

来源：中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2014, 10(05): 36-41.

DOI：10.3877/cma.j.issn.1673-5250.2014.05.009

• 组蛋白乙酰转移酶
• 组蛋白脱乙酰基酶
• 细胞分化
• 丙戊酸

目的探讨组蛋白乙酰化/去乙酰化在C2C12肌细胞分化过程中的作用。方法选择C2C12肌原细胞为研究对象,按照培养基及干预条件的不同,将其分为对照组、马血清诱导分化组、1mmol/L丙戊酸(VPA)组、2mmol/L VPA组、4mmol/L VPA组及8mmol/L VPA组,每组样品数为6个,其培养基内分别含10%胎牛血清、2%马血清、2%马血清+1mmol/L VPA、2%马血清+2mmol/L VPA、2%马血清+4mmol/L VPA及2%马血清+8mmol/L VPA。比较不同浓度VPA组与马血清诱导分化组肌小管分化率差异。采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)与Western蛋白质印迹法(Western blotting)检测肌相关蛋白[包括肌球蛋白(Myosin)、肌钙蛋白(Troponin)I-SS、成肌细胞分化(Myod)1蛋白]和组蛋白去乙酰化酶(HDAC,包括HDAC1,2,3)在C2C12细胞分化过程中及使用不同浓度VPA干预C2C12细胞分化过程中的转录及蛋白表达水平,并比较其表达水平差异。结果本研究结果为:1马血清诱导分化组较对照组的肌相关蛋白mRNA和蛋白表达水平均显著升高,且差异有统计学意义(P<0.01);而HDAC mRNA和蛋白表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。2各浓度VPA组肌小管分化率分别较马血清诱导分化组显著下降,且差异有统计学意义(P<0.05)。34mmol/L VPA组及8mmol/L VPA组肌相关蛋白及HDAC mRNA和蛋白表达水平分别较马血清诱导分化组显著下降,且差异有统计学意义(P<0.05);4给予VPA干预后,不同浓度VPA组C2C12细胞的Myosin、Troponin ISS、Myod1、HDAC1,2,3的mRNA及蛋白表达水平均呈浓度依赖性,随着VPA浓度增加,表达水平逐步下降(r=-0.92,-0.89,-0.93,-0.84,-0.93,-0.97;r=-0.99,-0.86,-0.92,-0.95,-0.91,-0.96;均为P<0.05)。结论组蛋白乙酰化/去乙酰化在C2C12肌原细胞成肌分化过程中具有重要意义,HDAC表达抑制可导致肌相关蛋白表达水平下降,进而抑制成肌分化。

• 单位
  四川大学华西第二医院; 四川大学; 四川大学华西口腔医学院